Nézzünk most végig egy napot!
07:07 ébresztő, 07:12-kor kikapcsolva. Nehéz kelés egy éjszakába nyúló (értelmetlen, de annál szórakoztatóbb) Internetes csevej után.
Gondolatok összeszedése: túl fogom élni? 8-kor el kell végezni az SR kezelést az ismételendő qPCR mérésre szánt sejteken. Ó, igen, mintavételi időpontok 4, 8, 12, 24 és 48 óra elteltével, a 12 órás fincsi lesz... Délután meg kell csinálni az I61-kezelést egy másik adag sejten. Folytatni kell a tegnap elkezdett WB-ot, ma jó eredményeket várok. Lássuk!
Ha valaki szereti reggel a jó kávét, esetleg egy cigarettát hozzá, jó taktika az időben történő munkahelyre éréshez, ha az ember nem tart otthon kávét, esetleg cigit sem. 07:52-kor már bent is vagyok, a sejtes melóhoz szükséges reagensek a termosztátban (előmelegítés 37 fokra), WB membránokról a primer antitest leszedése, első mosás PBST-ben, ez 15 perc. Kávé, cigaretta.
Egy kolléganő használja a steril boxot, kellemetlen ütközés. Hamarabb kellett volna bejönni? Újratervezés: nem lehet újratervezni, ha a sejtekkel 9-kor kezdek, este 9 előtt nem jöhetek haza...
Kolléganő meggondolja magát, sejtekről a médium eltávolítása, helyére PBS (ez egy foszfát-pufferelt fiziológiás sóoldat, a sejtek életben maradnak benne, de tápanyagot nem tartalmaz), SR-kezelés a tervezett dózisokkal. Sejtek friss/eredeti médiumot kapnak (ez is a vizsgálat része; a sejtek gyakran jobban szeretik a már használt médiumot, mert ebbe már különböző anyagokat bocsátottak ki, így jobban érzik benne magukat - belakták). Fél óra alatt meg is van az 5 plate (összesen 40 minta).
Közben a WB membrán mosása, majd a szekunder antitestek következnek a megfelelő hígításokban. Egy óra szobahőn (10:45-ig).
Megbeszélés egy kollégával egy másik kutatással kapcsolatban. Megbeszélés egy harmadik kollégával: fél 12-kor fel kell menni a sötét szobába, megcsinálni a WB filmre rögzítését, előhívását. Elvileg rendben.
10:45-kor a szekunder antitest feleslegének (ami nem kötődött a primerhez) lemosása, PBST, 3x15 perc. Közben telefonhívás: a sötét szoba kulcsát mégis a portáról kell majd elkérnem... Kulcs elkérése, a híváshoz szükséges anyagok összeszedése (kemilumineszcens folyadék - a szekunder antitesthez kötött enzim fényt bocsát ki, ezt rögzítem a filmen, hívó, fixáló, pipetta, kesztyű, stb.).
Sötét szoba, membránok elhelyezése a fotó-kazettában, kemilumineszcens reagens membránra pipettázása, sötét (mire megszokja a szemem a sötétet...), film, 5 másodperc, hívó, víz, fixáló, eredmény: a normalizáló fehérje jele szép.
Újabb film, 3 perc (legutóbb ez elég volt a DKIG detektálásához), hívó, víz, fixáló, eredmény: nincs jel. Elkeserítő...
A remény hal meg utoljára - film, 5 perc, hívó, víz, fixáló, eredmény: nincs jel. Na húzzunk, mert délben 4 órás mintavétel az SR-kezelt sejtekből.
Vissza a laborba, cuccok elpakolása (hűtős a hűtőbe), sejtek ki az inkubátorból, tenyésztőmédium le, mosás PBS-sel, sejtek felvétele TRIzol-ban (RNS izolálás kezdő lépése), minták 1 mL-es csövekbe gyűjtése, mínusz 70 fok. 13 óra, ebédelni kellene. Telefon a kollégának, nem tud jönni enni, egerezik...
Kaja, kávé, cigi, labor, iroda. Irodában röpke megbeszélés; a Főfőnök holnapután elutazik külföldre, megrendeléseket alá kell íratni. Szükséges termékek árajánlatainak előszedése, bevezetés több helyre, megrendelőlap megírása, nyomtatás, árajánlatok csatolása. Végösszeg: 84.000 Ft. Gyanús, mert három 40.000 körüli terméket rendelek. Dokumentumok újra átnézése. Ja, megvan. 130.000 Ft. Fel a gazdasági osztályra, az ügyintéző nincs bent. Találkozás a folyosón a Főfőnökkel, aláír, eredeti megrendelés Panninak (másik gazdaságis hölgy), másolat Lilike asztalára. Ő csak hétfőn lesz, de a rendelés ma elmehet Panni jóvoltából. Rossz előérzet: ha a megrendelőből két példány van, abból kavar lesz...
Panni már hazament (fél 3!), rendelés tehát csak holnap...
Megbeszélés a Kisfőnökkel, közben eszembe jut, hogy a fotóssal le akartam valamit fotóztatni 2-kor, de elfelejtettem. Az anyag kellene a holnapi előadásomhoz. Mert holnap az is lesz. Telefon, Fotós már nem ér rá, majd holnap reggel (holnap reggel 24 órás mintavétel, de megoldom. Az előadás csak fél 3-kor kezdődik).
A holnapi prezentáció szerkesztgetése, grafikonok igazgatása, diaháttér (jó a múltkori, ez úgyis annak a folytatása). 4-kor 8 órás mintavétel. Ez újabb sejtek TRIzolban történő felvételét, majd fagyasztását jelenti.
Prezentáció szerkesztésének folytatása. Közben betoppan a kolléga, aki nem ért rá ebédelni, most ráér. 40 percet egy kutatási projekt kiadványával töltünk. Örülünk a benne levő ismerős arcok fotóinak, nők részletes elemzése, ismerős kutatók életének megbeszélése.
5-kor el kellene végeznem a sejteken a médiumcserét, a normál (kontroll) médiumot lecserélni normál (kontroll)-ra, I61-oldószer tartalmúra ill. I61 tartalmúra. Mindkét steril boxot használja két kolléga. Hmm. Nem baj, ha 6-kor csinálom, az sem baj, csak akkor mától szombatig minden nap 6-kor dolgom lesz...
Fél 6-kor szabadul egy steril fülke, a médiumcseréket viszonylag gyorsan megoldom. Kollégák hazamennek, én maradok, a 12 órás mintavétel 20:30-ra esik. Addig befejezem a holnapi prezentációt. Kihagyok egy diát a holnap fotózandó objektumnak. Még egy szoftveres képanalízis is kelleni fog. Az jó esetben 20 perc, rossz esetben egy óra. Bele kell férnie. A fotózást múlt héten is megcsinálhattam volna...
20:30-kor a 12 órás sejtek TRIzol kezelése, mínusz 70 fok, rendrakás, labor ellenőrzése, tünés haza.
Itthon a prezentáció ismételt átfutása, egy grafikon elég furcsa, SR hatására a DKIG expressziója 50-szeres emelkedést mutat 24 óránál, ez csaknem lehetetlen. Számítások ellenőrzése: rendben. Nyers adatok: rendben. Úgy tűnik, az adat helyes. Az az érzésem, hogy nem helyes, a 10x-es válasz is durva lenne...
Most írom a blogot. Aztán zuhany, miegymás, alvás, holnap 07:07-kor ébresztő, és indul az újabb nap.
Tervek: 8-kor a 24 órás sejtek leállítása TRIzollal, fotóztatás Fotóssal, fotók analízise, grafikonok legyártása, Előadás-anyagba illesztés, előadás megbeszélése, véglegesítés.
Ebéd, majd előadás. Utána sejtek passzálása, a többin médiumcsere, rövid nap lesz. Vagy nem? Majd elmondom!
